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本制品是真菌基因组DNA柱式提取试剂盒，专门用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA。

真菌DNA提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。为此，我公司开发了本试剂盒。

• 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
  
• 既可以采取液氮研磨法破裂真菌，也可用玻璃珠法破碎真菌，两种方法均属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
  
  • 文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染，用于提取真菌DNA往往会造成污染。
• 本方法提取一个样品只需要30分钟，方便、快速和高效。
  
• 一次可以处理5mL的过夜真菌培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20kb左右，每毫升菌液的DNA产率一般在1～3μg。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。
  
• 不会发生离心柱堵塞现象。

• 收集菌体或孢子:
  
  • 对菌液：取3～5mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
    
  • 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约50mg），转移到装有1mL自备无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
    
  • 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到塑料离心管中，然后进入下一步操作。
• 在上述真菌材料中加入自备的无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。
  
• 裂解真菌：
  
  • 液氮研磨：在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉，然后转移到干净的离心管中，在离心管中加入500μL真菌DNA提取溶液A，常温涡旋震荡3分钟。
    
  • 玻璃珠破碎法：在没有液氮的条件下，采用此法。在菌体沉淀中加入500μL真菌DNA提取溶液A和0.5克的酸洗玻璃珠，常温涡旋震荡10分钟。
• 在离心管中加入500μL真菌DNA提取溶液B，涡旋震荡3分钟，12000rpm离心2分钟，将透明的上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。不要取蓝色的液体。
  
• 在上清中加入3倍体积的真菌DNA提取溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
  
• 在离心吸附柱中加入500μL通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。此步可以洗涤掉杂质。
  
• 重复上步操作一次。
  
• 12000rpm空柱离心1分钟。
  
• 加入50～100μL DNA洗脱液，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为真菌DNA样品。
  
• 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1～2次。
  
• 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。